06/2022 – 02/2024 | Graduate Researcher (First Author Project)

Project: Identifying ELOB as a Novel Regulator of Mitochondrial Function and Radiosensitivity in TNBC
Supervisor: Dr. Zhichao Fu, The 900th Hospital of the Joint Logistic Support Force (FJMU)
Publication: Li, G., et al. Enhancing radiosensitivity in triple-negative breast cancer through targeting ELOB. Breast Cancer (2024). https://doi.org/10.1007/s12282-024-01554-w

• Clinical Significance & Bioinformatics: Identified Elongin B (ELOB) as a key prognostic marker in Triple-Negative Breast Cancer (TNBC) by analyzing TCGA transcriptomic data, discovering that high ELOB expression correlates with poor overall survival specifically in patients receiving radiotherapy.

• Genome Editing & Phenotyping: Leveraged CRISPR-Cas9 technology to generate stable ELOB-knockout (KO) TNBC cell lines. Demonstrated through SRB and colony formation assays that ELOB depletion significantly sensitizes TNBC cells to ionizing radiation without affecting baseline viability or migration.

• Subcellular Mechanistic Discovery: Deciphered the non-canonical role of ELOB in mitochondria. Used cell fractionation, immunofluorescence (confocal microscopy), and Proteinase K protection assays to validate ELOB’s dual localization in both the nucleus and mitochondrial matrix.

• Metabolic Profiling: Conducted functional metabolic assays using the Seahorse XFe96 Analyzer (Mito Stress Test), proving that ELOB is indispensable for maintaining mitochondrial oxygen consumption rates (OCR) and respiratory capacity.

• Rescue & Molecular Pathways: Employed molecular cloning and lentiviral transduction to express MTS/NLS-tagged ELOB constructs, confirming that mitochondrial ELOB, rather than nuclear ELOB, restores radioresistance. Further elucidated that ELOB regulates the expression of 13 mtDNA-encoded genes and the activity of respiratory chain complexes (I-V).

• Conclusion: Established the ELOB-mtDNA-Metabolism axis as a critical determinant of radioresistance, proposing ELOB inhibition as a potent strategy to overcome therapeutic resistance in TNBC.

临床意义与生物信息学：通过分析TCGA转录组数据，将Elongin B（ELOB）鉴定为三阴性乳腺癌（TNBC）的关键预后标志物，发现高ELOB表达与接受放疗患者的较差总生存期显著相关。

基因组编辑与表型分析：利用CRISPR-Cas9技术构建稳定的ELOB基因敲除（KO）TNBC细胞系；通过SRB和克隆形成实验证实，ELOB缺失可显著增强TNBC细胞对电离辐射的敏感性，且不影响基线活力和迁移能力。

亚细胞机制发现：解析ELOB在线粒体中的非经典功能。采用细胞分级分离、免疫荧光（共聚焦显微镜）及蛋白酶K保护实验，验证ELOB在细胞核和线粒体基质中的双重定位。

代谢 profiling：使用Seahorse XFe96分析仪进行功能性代谢测定（线粒体压力测试），证明ELOB对于维持线粒体耗氧率（OCR）和呼吸能力不可或缺。

回补实验与分子通路：通过分子克隆和慢病毒转导表达MTS/NLS标记的ELOB构建体，证实线粒体ELOB（而非核ELOB）可恢复放射抵抗性；进一步阐明ELOB调控13个线粒体DNA编码基因的表达以及呼吸链复合物（I-V）的活性。

结论：确立ELOB-mtDNA-代谢轴为放射抵抗性的关键决定因素，提出抑制ELOB是克服TNBC治疗耐药性的有效策略。

用什么方法 做什么事情 取得了什么结果
设计并在癌细胞系上执行了 CRISPR 基因编辑实验，确定了两个新的基因靶点，将治疗效果提高了 30%。

利用tcga数据库研究elob和tnbc患者的预后关系，发现在放疗的tnbc病人中，elob高表达的病人预后更差。

利用CRISPR技术在tnbc细胞系中敲低elob基因，使用Sulforhodamine B assay检测敲低后的细胞放疗敏感性增加了，使用Seahorse线粒体压力测试检测测敲低后的细胞线粒体呼吸降低了，使用qpcr确定敲低后的tnbc细胞mtDNA表达下降，进一步导致复合体I、III、IV和V的活性显著下降。

利用免疫荧光以及细胞组分分离后wb，确定elob的细胞定位有两处，利用慢病毒分别转导核定位的elob和线粒体定位的elob，验证是线粒体中的elob加强了细胞呼吸，并让细胞放疗抵抗性增加。

得出结论：靶向ELOB可有效调节线粒体功能，从而增强TNBC细胞的放射敏感性

• 旨在探究靶向Elongin B（ELOB）提高三阴性乳腺癌（TNBC）放疗疗效的潜力

• 使用磺酰罗丹明B（SRB）实验，比较ELOB基因敲除（KO）TNBC细胞与表达ELOB的TNBC细胞之间的放射敏感性

• 采用免疫荧光、细胞分级分离和蛋白质印迹（Western blot）分析，检测ELOB在细胞核和线粒体中的亚细胞定位

• 利用慢病毒介导的转导，分别评估线粒体ELOB对mtDNA表达及线粒体呼吸链复合物的影响

• 得出结论：靶向ELOB可有效调节线粒体功能，从而增强TNBC细胞的放射敏感性

根据你要求的 APR (Action-Project/Problem-Result) 模式，我为你重新组织了这段研究经历。这种写法能够非常清晰地向欧洲导师展示你的主动性（Action）、技术熟练度（Project/Skill）以及科研产出（Result）。

Research Experience: ELOB-Mediated Radiosensitivity in TNBC

利用tcga数据库研究elob和tnbc患者的预后关系，发现在放疗的tnbc病人中，elob高表达的病人预后更差。

• Analyzed TNBC patient cohorts from the TCGA database using bioinformatic tools to evaluate the prognostic value of Elongin B (ELOB), revealing a significant correlation between high ELOB expression and poor overall survival specifically in patients undergoing radiotherapy.
• 分析了TCGA数据库中的TNBC患者队列，利用生物信息学工具评估Elongin B (ELOB)的预后价值，揭示出高ELOB表达与接受放疗患者的较差总生存期之间存在显著相关性。
  (Action: Analyzed | Project: TCGA data & prognosis | Result: Identified ELOB as a radiotherapy-specific prognostic marker)

利用CRISPR技术在tnbc细胞系中敲低elob基因，使用Sulforhodamine B assay检测敲低后的细胞放疗敏感性增加了，使用Seahorse线粒体压力测试检测测敲低后的细胞线粒体呼吸降低了，使用qpcr确定敲低后的tnbc细胞mtDNA表达下降，进一步导致复合体I、III、IV和V的活性显著下降。

• Engineered stable ELOB-knockout TNBC cell lines via CRISPR-Cas9 technology and assessed their phenotype through Sulforhodamine B (SRB) assays and Seahorse XFe96 Mito Stress Tests, demonstrating that ELOB depletion significantly enhances radiosensitivity and impairs mitochondrial oxygen consumption.

• 通过CRISPR-Cas9技术构建稳定的ELOB基因敲除TNBC细胞系，并通过磺酰罗丹明B（SRB）实验和Seahorse XFe96线粒体压力测试评估其表型，证实ELOB缺失显著增强放射敏感性并损害线粒体耗氧量。
  (Action: Engineered & Assessed | Project: CRISPR knockout & functional assays | Result: Validated ELOB's role in radioresistance and respiration)

• Quantified mitochondrial DNA (mtDNA) expression and the activity of respiratory chain complexes (I, III, IV, V) using RT-qPCR and enzymatic microplate assays, elucidating that ELOB deficiency leads to a widespread reduction in mtDNA-encoded genes and subsequent mitochondrial dysfunction.
  (Action: Quantified | Project: qPCR & Complex activity assays | Result: Uncovered the molecular mechanism of ELOB-mediated mitochondrial regulation)

• 利用RT-qPCR和酶标板比色法定量检测线粒体DNA（mtDNA）表达及呼吸链复合物（I、III、IV、V）的活性，阐明ELOB缺陷导致mtDNA编码基因广泛下调，进而引起线粒体功能障碍。
  （动作：定量检测 | 项目：qPCR与复合物活性实验 | 结果：揭示了ELOB介导线粒体调控的分子机制）

• Characterized the subcellular localization of ELOB via confocal immunofluorescence and cell fractionation, and executed rescue experiments using lentiviral-mediated transduction of NLS- or MTS-tagged ELOB constructs, validating that it is the mitochondrial pool of ELOB, rather than the nuclear pool, that drives respiration and radioresistance.
  (Action: Characterized & Executed | Project: Protein localization & Lentiviral rescue | Result: Confirmed mitochondrial ELOB as the primary therapeutic target)

• 通过共聚焦免疫荧光和细胞分级分离表征ELOB的亚细胞定位，并利用慢病毒介导的NLS或MTS标签ELOB构建体转导执行回补实验，验证驱动呼吸和放射抵抗的是线粒体ELOB而非核ELOB。
  （动作：表征与执行 | 项目：蛋白定位与慢病毒回补 | 结果：确认线粒体ELOB是主要治疗靶点）

利用免疫荧光以及细胞组分分离后wb，确定elob的细胞定位有两处，利用慢病毒分别转导核定位的elob和线粒体定位的elob，验证是线粒体中的elob加强了细胞呼吸，并让细胞放疗抵抗性增加。

得出结论：靶向ELOB可有效调节线粒体功能，从而增强TNBC细胞的放射敏感性

• Established ELOB as a pivotal regulator of mitochondrial homeostasis in TNBC, concluding that targeting the ELOB-mtDNA axis effectively sensitizes tumors to radiotherapy, providing a novel theoretical basis for improving TNBC treatment outcomes.
  (Action: Established | Project: Mechanistic link | Result: Proposed a new therapeutic strategy for TNBC)
  确立ELOB为TNBC线粒体稳态的关键调控因子，得出结论：靶向ELOB-mtDNA轴可有效增敏肿瘤放疗，为改善TNBC治疗结局提供了新的理论依据。

修改要点解析 (Why this APR works):

1. Action (动词选择):

   • 使用了 Analyzed (分析), Engineered (构建/工程化), Quantified (定量), Characterized (表征), Established (确立)。这些词汇比简单的 "did" 或 "used" 更有力度，体现了你的专业度。

2. Project/Problem (技能与方法):

   • 在每一句中都嵌入了核心技术点：TCGA, CRISPR-Cas9, SRB assay, Seahorse XFe96, RT-qPCR, Confocal microscopy, Lentiviral transduction。
   • 这直接告诉导师：你不需要培训，你已经掌握了这些高级技能。

3. Result (产出与影响):

   • 不只是说“得到了结果”，而是说“揭示了 (revealing)”、“论证了 (demonstrating)”、“阐明了 (elucidating)”。
   • 特别是提到了 "specifically in patients undergoing radiotherapy" 和 "mitochondrial-specific ELOB"，这显示了你对课题细节的严谨把控。

建议： 在 CV 中，你可以将这些 Action Verbs（如 Analyzed, Engineered）加粗，让阅读简历的教授在扫描页面时瞬间抓取到你的能力关键词。